## 人卵巢癌细胞A2780培养说明书

### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：人卵巢癌细胞A2780
**生长特性**：贴壁生长
**冻存条件**：无血清冻存液
**培养体系**：1640+10% FBS + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S
**传代方法**：初次建议1:2传代，传代情况2天换液。

**备注**：用无菌离心管收集培养基，以备过渡对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

### 二、细胞收到后的处理

在细胞恢复良好状态后，应灌满完全培养液并密封瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。在收到细胞时，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后放置于超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时，以稳定细胞后再进行处理。请用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议包括40x，100x和200x的各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

**注意**：在放入培养箱时，请将盖子拧松。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。

### 三、细胞培养步骤

#### a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5 ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2的孵箱继续培养；若细胞密度超过80%，则可以进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2 ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞是否变圆并脱落，快速进行后续操作。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出细胞悬液，转移至15 ml离心管中，并在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2 ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8 ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

#### b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS洗涤细胞1次。
2. 添加约1 ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变化后，加入5 ml完全培养液结束消化，轻轻吹打使细胞脱落，随后转移至15 ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1 ml 尊龙凯时生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转动入液氮中。

#### c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5 ml完全培养基的15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5 ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶内，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

某些细胞较为特殊，可能在运输过程中因贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。请收集培养瓶内的所有培养液至离心管中，进行1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养（后期对比），补充胰酶1-2 ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5 ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，加入1-2 ml完全培养基重悬后，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8 ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

### 五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况包括：
1. 运输过程中细胞丢失、瓶身破损或培养液漏液等情况可重发；
2. 细胞污染问题需在48小时内提供真实实验结果以便核实，合格后可重发；
3. 常温发货细胞在静置24小时或干冰冻存送货细胞复苏后24小时，大多数细胞未存活需提供清晰的细胞状态照片可重发；
4. 收到冷链发货细胞后如未开封且静置4小时出现污染，需满足条件重发；
5. 细胞活性问题需在7天内验证，合格后可重发；
6. 收到当天及第2、3天请拍照确认，3天未反馈视为合格；
7. 4-7天内如出现问题，需提供前三天的照片与操作详细步骤，向技术人员咨询，若判定为我方责任则可重发。

2）细胞出现问题，不予重发的情况包括：
1. 客户造成的细胞污染；
2. 客户操作不当导致细胞状态不良；
3. 非本库推荐的培养体系引起的细胞问题；
4. 未提供细胞培养前三天的照片；
5. 细胞在培养时经其他处理；
6. 收到后2天内未告知；
7. 其他根据具体情况决定。

以上是针对尊龙凯时人卵巢癌细胞A2780培养的详细说明，请务必严格遵循操作流程，以确保细胞健康与实验成功。