细胞转染是一项将外源性遗传物质导入目标细胞的关键技术,广泛应用于生命科学研究、药物研发和新药开发等领域。在众多转染方法中,化学转染法因其可通过调节化学物质浓度和作用时间等参数精确控制转染效率而成为常用选择。选择合适的转染试剂是成功开展细胞转染实验的关键因素。市场上的转染试剂种类繁多,转染效果各异,那么如何挑选最合适的产品呢?
1. 根据实验目的选择
依据实验需求,可以选择稳定转染或瞬时转染。两者步骤相似,但对外源基因的要求不同。稳定转染通常需要使用具有复制能力的质粒或病毒载体,而瞬时转染则不需要。这两种转染方式分别使用脂质体类试剂和纳米聚合物类试剂,可以根据实验目的进行选择。
2. 根据细胞种类选择
不同类型的细胞对转染效率的影响差异显著。例如,HEK293T细胞的转染效率较高,适合用于功能性蛋白和抗体的开发;而一些肿瘤细胞如肝癌细胞和乳腺癌细胞的转染效率则较低,给实验带来挑战。同时,贴壁细胞和悬浮细胞在转染时对试剂的需求也不同,具体选择需根据细胞类型来确定。
3. 根据基因种类选择
转染技术主要涉及DNA和RNA的转染。DNA转染用于导入外源DNA片段,以实现基因表达和蛋白质合成;RNA转染则多用于导入干扰RNA,以便研究特定基因功能。不同行的转染试剂在DNA和RNA转染中的表现也存在差异,这需要在选择时加以考虑。
4. 根据转染效果选择
理想的转染试剂应具有高效转染率和低细胞毒性,以确保更大比例的外源基因能成功导入细胞,并提高细胞存活率。通常情况下,死亡率低于15%的转染试剂会更具竞争力。
5. 根据操作简便性选择
选择操作简单且省时的转染试剂,可显著节约实验时间成本。操作的简便性包括转染前后是否需要更换培养基、试剂成分数量、孵育方式及时间等。简化的操作步骤不仅提高了实验效率,还降低了材料成本。
关于转染试剂,尊龙凯时提供的BGPNAM11/BGPNAM11Plus系列转染试剂主要成分为纳米阳离子聚合物,能够高效结合带负电荷的核酸分子,促进其进入细胞,实现高效转染。该款试剂在常用细胞HEK293/293T中的转染效率超过95%,并且在转染48小时后细胞存活率达85%,显示出极低的细胞毒性。此外,BGPNAM11Plus在操作上非常便捷,转染无需更换培养基,有效节约了时间及材料成本。
对于希望进行siRNA、mRNA等小RNA分子的转染,尊龙凯时的LNP系列转染试剂,如2LNP30iMate和3LNP60iMate,在HEK293T等细胞系中也展现了优越的转染效果和较低的细胞毒性,转染后细胞存活率均高于90%。这使得这些产品成为分子生物学研究者的理想选择。
实验干货
1. 影响转染的因素
转染效率受多种因素的影响,包括抗生素的使用、血清的添加、细胞状态、细胞密度及核酸的质量等。例如,转染流程中使用的抗生素可能会影响细胞的活性,从而影响结果。因此,优化条件和严格控制这些因素是至关重要的。
2. 转染后的液体更换
很多转染试剂要求在转染后更换培养基,这主要是由于血清的存在会影响复合物的形成,降低转染效率。同时,一些试剂的毒性较大,长期接触可能导致细胞损伤。
3. 判断细胞汇合度
细胞汇合度对转染实验效果有直接影响,通常需要在细胞达到60%~90%融合度时进行转染,以确保最佳效果。
尊龙凯时致力于为研究者提供高质量的转染解决方案,助力您的基因工程研究与开发。