细胞培养与传代方法

在生物医学研究中，细胞培养是关键步骤之一。以下是细胞培养的条件与步骤，确保细胞健康生长和有效传代。

培养条件

使用1640培养基，添加10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链菌素(PS)，适用于贴壁及悬浮细胞。培养温度设定为37℃，并在5% CO₂的条件下进行培养。

传代方法

按照细胞的生长情况，可以建议不同的传代比例。对于细胞汇合度未超过80%的情况，建议使用1:2的传代，确保细胞保持在最佳生长状态。

传代步骤

1. 首先，弃去培养瓶中的上清液，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 接着，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否变圆并脱落。
3. 当大部分细胞脱落时，立即加入5ml的完全培养基停止消化，并轻轻吹打细胞，使其完全脱落。
4. 将细胞悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml的完全培养基重悬。
5. 最后，按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养。

细胞冻存与复苏

在细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，可以进行冻存操作。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻观察至细胞变圆后添加完全培养基终止消化。
3. 轻轻将细胞悬液移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
4. 弃上清液后，加入1ml的无血清冻存液，混匀后装入冻存管中。
5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中存放超过24小时再转入液氮罐中。

注意事项

在细胞运输过程中，部分细胞可能会因贴壁不牢而脱落。这种现象属于正常情况。若脱落数量较多，可将培养液收集于离心管中，进行离心处理后，再按照标准步骤进行传代恢复。

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